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细胞成骨诱导Osteogenesis一些小经验
本文内容引用自B站 仅供参考 引用地址
【先来说成骨诱导液的配制】
成骨诱导液的配方，已经有好多好多的现成文章可以查询。但是配方与配方之间，似乎总是存在些微差异，该采用谁的呢？
首先基础Medium，很多人用a-MEM，有一部分人用DMEM，还有其它很多种不常见的培养液。选择哪一种，通常是所培养细胞的一贯适用培养液。大多数的细胞，a-MEM和DMEM几乎是通用的。DMEM有高糖（4.5g/L）和低糖（1.0g/L）之分，有的细胞对此有要求，需要注意。
FBS血清浓度，绝大多数的文章都写的10%。P/S抗生素的浓度，绝大多数的文章都写的1%。没什么可说的。
Medium + 10% FBS + 1% P/S，构成了可以养细胞的培养液（后面简称为Basal Medium，BM）。到这里，培养液的各组分都是比较稳定的，可以一次性就配够整套实验要用的量，4度保存，不污染的话，存小半年都问题不大。
但是！接下来的几个成分，就不建议一次性加入上述大量培养液，长期保存了。建议先配成浓度较高的储存液，过滤、分装，-20度冻存，每次换液取出一份解冻，加入上述的BM中。主要是以下的三个：
Ascorbic Acid，抗坏血酸，其实就是维生素C，可先配成500X的储存液（懒人配方：称取100mg溶于水或PBS，终体积4ml），其最终的工作浓度是50ug/ml（懒人配方：每50ml BM中需加入100ul 储存液）。
b-Glycerophosphate （b-GP）Disodium，b-甘油磷酸钠，可先配成100X的储存液（懒人配方：称取7.65g溶于水或PBS，终体积25ml），其最终的工作浓度是10mM（懒人配方：每50ml BM中需加入500ul 储存液）。
Dexamethasone，地塞米松，可先配成1000X的储存液（懒人配方：称取0.1g溶于水或PBS，终体积25ml，再取5ul加入到5ml水或PBS，我想说这玩意儿真是微量），其最终的工作浓度是10nM（懒人配方：每50ml BM中需加入50ul 储存液，我还是想说这玩意儿真是微量）。
上述三个成分，维生素C和地塞米松，见光易分解，配前的粉末和配后的储存液，注意避光保存。b-GP粉末易受潮吸水，配前的粉末注意密封，并按照说明书存于4度。
上述三个成分，是成骨诱导液的主要成分，属于必加的，几乎每篇文章都有写，所用浓度也大概差不多。除此之外，经常会看见有的文章里写一些别的、不尽相同的成分，那些就都是些充分不必要条件了，根据你的细胞和所买到的基础Medium来决定是不是要加，以及加多少。
【成骨诱导实验的一般时长设置】
经典的成骨诱导实验，包含ALP碱性磷酸酶和Alizarin red茜素红染色结果。ALP染色一般发生在成骨诱导后的5-7天（一般是7天），茜素红染色从10天到20+天（一般是21天），都有文章报道。由于细胞培养的天数较久，细胞长得很满，成膜后容易发生边缘卷边儿，强烈建议茜素红染色的细胞接种于6孔板内，因为孔径越小的板子，越容易发生边缘卷边儿，结果不好看甚至不能看。ALP染色的板子用12孔板问题不大，细胞充裕的话用6孔板更好看。
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